Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
# Допускается идентификация жирных кислот испытуемого масла путем сравнения времен удерживания пиков на хроматограмме испытуемого раствора с временами удерживания пиков на хроматограмме раствора сравнения или на стандартной хроматограмме, описанной в частной статье.
# Приведенное время удерживания - разница между временем удерживания пика вещества и временем удерживания несорбирующегося (в условиях определения) вещества.
б) Для хроматограмм, полученных с использованием линейного градиента температуры, определяют времена удерживания, находящиеся в зависимости от числа атомов углерода в жирных кислотах, и идентифицируют жирные кислоты, входящие в состав испытуемого масла, путем сравнения с калибровочной кривой.
Количественный анализ. Обычно используют метод внутренней нормализации; при этом сумму площадей всех пиков на хроматограмме, кроме пиков, относящихся к растворителю, принимают за 100%. Рекомендуется применение электронного интегратора. Содержание каждого компонента вычисляют как отношение площади соответствующего пика к сумме площадей всех пиков. Пики, площадь которых составляет менее 0.05% от суммы площадей всех пиков, не учитывают, если нет других указаний в частной статье.
В определенных случаях, т.е. при наличии жирных кислот с 12 или менее атомами углерода, в частной статье должен быть указан поправочный коэффициент для преобразования площадей пиков в проценты (м/м).
МЕТОД В
Этот метод неприменим для масел, содержащих глицериды жирных кислот с эпокси-, гидроксиэпокси-, циклопропиловыми и
циклопропениловыми группами и для масел с кислотным числом более 2, О.
Испытуемый раствор. 0,100 г испытуемого вещества помещают в центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой, растворяют в 1 мл
гептана Р и 1 мл диметилкарбоната Р и энергично перемешивают при умеренном нагревании (от 50°С до 60°С). К еще теплому раствору прибавляют 1 мл раствора 12 г/л натрия Р в метаноле безводном Р, приготовленного с необходимыми предосторожностями, и энергично перемешивают в течение 5 мин. Прибавляют, 3 мл воды дистиллированной Р и энергично перемешивают в течение 30 с. Центрифугируют в течение 15 мин с ускорением 1500 g. Хроматографируют 1 мкл органического слоя.
Растворы сравнения и оценка хроматограмм. Если в частной статье нет других указаний, поступают, как указано в Методе А.
Хроматографируют на газовом хроматографе с пламенно-ионизационным детектором в следующих условиях:
- кварцевая колонка длиной 30 м, с внутренним диаметром 0,25 мм, покрытая слоем макрогола 2О ООО Р толщиной 0,25 мкм;
- газ-носитель - гелий для хроматографии Р;
- скорость газа-носителя - 0,9 мл/мин;
- деление потока - 1:100;
- температура колонки и скорость подъема температуры - по следующей программе:
Время 1емпература Скорость подъема Примечания
(мин) (°С) температуры
(оС/мин)
Колонка 0-15 100 - Изотермический режим
15-36 100^225 10 Линейный градиент
температуры
36-61 225 - Изотермический режим
Инжектор 250
Детектор 250
МЕТОД С
Этот метод неприменим для масел, содержащих глицериды жирных кислот с эпокси-, гидроперекисными, альдегидными, кетоновыми, циклопропиловыми и циклопропениловыми группами и сопряженными полиненасыщенными и ацетиленовыми компонентами из-за частичного или полного разрушения этих групп.
Испытуемый раствор. 0,10 г испытуемого вещества помещают в коническую колбу вместимостью 25 мл, растворяют в 2 мл раствора 20 г/л натрия гидроксида Р в метаноле Р и кипятят с обратным холодильником в течение 30 мин. Затем через холодильник прибавляют 2,0 мл раствора бора фторида в метаноле Р и кипятят еще 30 мин, после чего прибавляют через холодильник 4,0 мл гептана Р и кипятят 5 мин. Охлаждают, прибавляют 10,0 мл раствора натрия хлорида насыщенного Р, встряхивают в течение 15 си прибавляют такой объем раствора натрия хлорида насыщенного Р, чтобы верхний слой поднялся к горлу колбы. Отбирают 2,0 мл верхнего слоя, помещают в делительную воронку, промывают тремя порциями воды Р, по 2 мл каждая, и высушивают над натрия сульфатом безводным Р.
Растворы сравнения, хроматографическая методика и оценка хроматограмм. Если в частной статье нет других указаний, поступают как указано в методе А.
2.4.23. СТЕРИНЫ В ЖИРНЫХ МАСЛАХ
ОТДЕЛЕНИЕ СТЕРИНОВОЙ ФРАКЦИИ
Получают неомыляемые вещества жирного масла и затем отделяют стериновую фракцию методом тонкослойной хроматографии (2.2.27), используя пластинки, покрытые тонким слоем силикагеля G P толщиной от 0,3 мм до 0,5 мм.
Испытуемый раствор (а). В колбу вместимостью 150 мл, снабженную обратным холодильником, помещают раствор 2 г/л бетулина Р в метиленхлориде Р в таком объеме, чтобы количество бетулина соответствовало около 10% содержания стеринов в образце, взятом для определения (т.е. в случае оливкового масла прибавляют 500 мкл, в случае других растительных масел 1500 мкл раствора бетулина). Выпаривают до сухого остатка в токе азота Р. Если в частной статье определяется только содержание индивидуальных стеринов в процентах к стериновой фракции, раствор бетулина можно не прибавлять.
